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巨噬細胞的分離培養(yǎng)與鑒定

更新時間:2020-01-08點擊次數(shù):2114

    巨噬細胞是動物機體內(nèi)重要的免疫細胞, 具有抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等重要作用, 被廣泛應(yīng)用于體外免疫增強藥物的非特異性免疫功能。有很多能從多種組織和器官中分離純化巨噬細胞,但這些方法大多都是繁瑣、復(fù)雜,所需時間長且耗資較大。本實驗就以小白鼠腹腔巨噬細胞為研究對象, 探索建立一種巨噬細胞體外分離培養(yǎng)與鑒定簡便的方法。

    首先選取一只小白鼠,腹腔注射不含小牛血清的rpmi-1640培養(yǎng)液5ml。輕柔小鼠腹部2-3min,靜置5-7min后將小鼠頸椎脫臼處死,至于解剖板上,無菌條件下打開腹腔,用注射器抽取腹腔液,離心5min (1000r/min),棄上清,用pbs洗滌2遍。再用含10%成牛血清的rpmi-1640培養(yǎng)液(0.1%雙抗溶液)調(diào)節(jié)至2×106ml-1,接種于培養(yǎng)瓶及6孔板,置5%的CO2培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)2h,棄上清。用不含小牛血清的rpmi-1640培養(yǎng)液洗滌2遍,然后加含有10%小牛血清的rpmi-1640培養(yǎng)液在37℃,CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)。

     巨噬細胞的觀察與鑒定

     然后稱取4g臺盼藍,加少量蒸餾水研磨,加雙蒸水至100ml,用濾紙過濾,4度保存。使用時。用pbs稀釋至0.4%。; 胰酶消化貼壁細胞,制備單細胞懸液,并作適當(dāng)稀釋。染色:細胞懸液與0.4%臺盼藍溶液以9:1混合混勻;

     在三分鐘內(nèi),分別計數(shù)活細胞和死細胞。鏡下觀察,死細胞被染成明顯的藍色,而活細胞拒染呈無色透明狀。

     瑞氏染色計算細胞純度

     細胞涂片自然干燥后,用蠟筆在兩端畫線,以防染色時染液外溢。隨后將玻片平置于染色架上,滴加染液3-5滴,使其蓋滿涂片,大約1分鐘后,滴加等量的染液,用吸耳球輕輕混勻。沖洗:染色5-10分鐘用流水染液,待干, 結(jié)果觀察,將干燥后的血涂片置顯微鏡下觀察。

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